इलेक्ट्रोब्लॉटिंग

स्थानांतरण स्टैक का योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व।^[1]

इलेक्ट्रोब्लॉटिंग जेल वैद्युतकणसंचलन के बाद पीवीडीएफ या nitrocellulose का उपयोग करके प्रोटीन या न्यूक्लिक एसिड को एक झिल्ली पर स्थानांतरित करने के लिए आणविक जीव विज्ञान / जैव रसायन / इम्यूनोजेनेटिक्स में एक विधि है।^[2]^[3] प्रोटीन या न्यूक्लिक एसिड को फिर विशिष्ट एंटीबॉडी, लिगेंड जैसे लेक्टिन, या दाग जैसे जांच का उपयोग करके आगे का विश्लेषण किया जा सकता है। इस विधि का उपयोग सभी पॉलीएक्रिलामाइड और एगरोज़ जैल के साथ किया जा सकता है। एक जेल से प्रोटीन स्थानांतरित करने के लिए एक वैकल्पिक तकनीक केशिका सोख्ता है।

विकास

इस तकनीक को 1989 में विलियम जे. लिटिलहेल्स द्वारा इलेक्ट्रोब्लोटिंग तकनीक शीर्षक के तहत एक पॉलीएक्रिलामाइड वैद्युतकणसंचलन या जेल की तरह एक झिल्ली पर स्थानांतरित करने के लिए पेटेंट कराया गया था।^[1]^[4]

इलेक्ट्रोब्लॉटिंग प्रक्रिया

यह तकनीक एक झिल्ली पर प्रोटीन या न्यूक्लिक एसिड चलाने के लिए करंट और ट्रांसफर बफर सॉल्यूशन पर निर्भर करती है। वैद्युतकणसंचलन के बाद, एक मानक टैंक या अर्ध-शुष्क सोख्ता स्थानांतरण प्रणाली स्थापित की जाती है। कैथोड से एनोड तक निम्नलिखित क्रम में एक स्टैक को एक साथ रखा जाता है: स्पंज | ट्रांसफर बफर में भिगोए हुए फिल्टर पेपर की तीन शीट | जेल | पीवीडीएफ या नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली | ट्रांसफर बफर में भिगोए हुए फिल्टर पेपर की तीन शीट | स्पंज। यह एक आवश्यकता है कि झिल्ली जेल और धनात्मक आवेशित एनोड के बीच स्थित हो, क्योंकि वर्तमान और नमूना उस दिशा में आगे बढ़ रहे होंगे। एक बार स्टैक तैयार हो जाने के बाद, इसे ट्रांसफर सिस्टम में रखा जाता है, और उपयोग की जा रही सामग्री के अनुसार उपयुक्त समय के लिए उपयुक्त परिमाण का करंट लगाया जाता है।

आमतौर पर वैद्युतकणसंचलन जेल को Coomassie शानदार नीले रंग के साथ दाग दिया जाता है ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि पर्याप्त मात्रा में सामग्री स्थानांतरित की गई है। क्योंकि प्रोटीन ब्लोटिंग के दौरान अपनी संरचना का हिस्सा बनाए रख सकते हैं या पुनः प्राप्त कर सकते हैं, वे immunoblotting शब्द को जन्म देने वाले विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ प्रतिक्रिया कर सकते हैं। वैकल्पिक रूप से प्रोटीन लिगैंड्स जैसे लेक्टिन्स के साथ प्रतिक्रिया कर सकते हैं, जिससे आत्मीयता (औषध विज्ञान) ब्लॉटिंग शब्द का जन्म होता है।

यह भी देखें

संदर्भ

↑ ^1.0 ^1.1 R C Dubey (2014). उन्नत जैव प्रौद्योगिकी. S. Chand Publishing. pp. 199–. ISBN 978-81-219-4290-4.
↑ David Sheehan (30 April 2013). Physical Biochemistry: Principles and Applications. John Wiley & Sons. pp. 206–. ISBN 978-1-118-68748-2.
↑ M. P. Bansal (1 January 2013). Molecular Biology and Biotechnology: basic experimental protocols. The Energy and Resources Institute (TERI). pp. 141–. ISBN 978-81-7993-379-4.
↑ "United States Patent 4840714". Archived from the original on 2007-09-29. Retrieved 2007-05-24.

बाहरी संबंध

Protein (Western) Blotting - Introduction to Antibodies Membrane Transfer
Detailed electroblotting to PVDF procedure - Protein Chemistry Laboratory

[Dubey2014-1] 1.0 ^1.1 R C Dubey (2014). उन्नत जैव प्रौद्योगिकी. S. Chand Publishing. pp. 199–. ISBN 978-81-219-4290-4.

[Sheehan2013-2] David Sheehan (30 April 2013). Physical Biochemistry: Principles and Applications. John Wiley & Sons. pp. 206–. ISBN 978-1-118-68748-2.

[Bansal2013-3] M. P. Bansal (1 January 2013). Molecular Biology and Biotechnology: basic experimental protocols. The Energy and Resources Institute (TERI). pp. 141–. ISBN 978-81-7993-379-4.

[4] "United States Patent 4840714". Archived from the original on 2007-09-29. Retrieved 2007-05-24.

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v t e Proteins: key methods of study
Experimental	Protein purification Green fluorescent protein Western blot Protein immunostaining Protein sequencing Gel electrophoresis/Protein electrophoresis Protein immunoprecipitation Peptide mass fingerprinting/Protein mass spectrometry Dual-polarization interferometry Microscale thermophoresis Chromatin immunoprecipitation Surface plasmon resonance Isothermal titration calorimetry X-ray crystallography Protein NMR Cryo-electron microscopy Freeze-fracture electron microscopy
Bioinformatics	Protein structure prediction Protein function prediction Protein–protein docking Protein structural alignment Protein ontology Protein–protein interaction prediction
Assay	Enzyme assay Protein assay Secretion assay
Display techniques	Bacterial display mRNA display Phage display Ribosome display Yeast display
Super-resolution microscopy	Photoactivated localization microscopy Vertico SMI

v t e Electrophoresis
History of electrophoresis
Techniques	Affinity electrophoresis Agarose gel electrophoresis Capillary electrochromatography Capillary electrophoresis Dielectrophoresis Difference gel electrophoresis Discontinuous electrophoresis Electroblotting Electrochromatography Electrophoretic mobility shift assay Gel electrophoresis Immunoelectrophoresis Iontophoresis Isotachophoresis Moving-boundary electrophoresis Polyacrylamide gel electrophoresis Temperature gradient gel electrophoresis Two-dimensional gel electrophoresis
Applications	DNA laddering DNA separation by silica adsorption Gel electrophoresis of nucleic acids Gel electrophoresis of proteins Serum protein electrophoresis
Theory	Electrical mobility Isoelectric focusing
Journals	Electrophoresis (journal)
Category Commons Analytical Chemistry

v t e Molecular probes
General	Southern blot (DNA) Northern blot (RNA) Western blot (protein) Eastern blot (post translational modification)
Interactions	Southwestern blot (protein:DNA) Electrophoretic mobility shift assay (DNA:protein) Far-western blot (protein:protein) Far-eastern blot (lipid:post translational modification) Northwestern blot (RNA:protein)

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